科研實(shí)驗(yàn)
生物實(shí)驗(yàn)室潔凈實(shí)驗(yàn)室微生物檢測
潔凈室(區(qū))微生物可檢測沉降菌或浮游菌。沉降菌檢測是通過自然沉降原理,收集空氣中的生物粒子于培養(yǎng)基平皿中,經(jīng)若干時(shí)間,在適宜的條件下讓其繁殖到可見的菌落進(jìn)行計(jì)數(shù),以平板培養(yǎng)皿中的菌落數(shù)來判定潔凈環(huán)境內(nèi)的活微生物數(shù),并以此來評(píng)定潔凈室(區(qū))的潔凈度。浮游菌的檢測是采用計(jì)數(shù)濃度法,即通過收集懸浮在空氣中生物粒子于專門的培養(yǎng)基,經(jīng)若干時(shí)間,在適宜的生長條件下其繁殖到可見的菌落進(jìn)行計(jì)數(shù),從而判定潔凈環(huán)境內(nèi)單位體積空氣中的活微生物數(shù),以此來評(píng)定潔凈室(區(qū))的潔凈度。實(shí)際檢測浮游菌和沉降菌時(shí),先確認(rèn)潔凈室(區(qū))的檢測條件能否達(dá)到級(jí)別要求。達(dá)到要求后,測試人員和檢測儀器等按潔凈室(區(qū))的進(jìn)出規(guī)定(如穿戴符合環(huán)境級(jí)別的工作服、紫外照射、儀器外體消毒等)進(jìn)出潔凈實(shí)驗(yàn)室(區(qū)),測試人員先測量測試區(qū)域的面積和體積,確定采樣次數(shù)和采樣點(diǎn)。浮游菌確定采樣量后按儀器操作規(guī)程操作,把空氣中懸浮的微生物采集到肉湯瓊脂培養(yǎng)基上。沉降菌確定采樣時(shí)間后直接把培養(yǎng)基裸露在空氣中,讓空氣中的微生物自動(dòng)降落在肉湯瓊脂培養(yǎng)基上。采樣要點(diǎn)見表4~7。采集完的培養(yǎng)基需在30℃~35℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng),時(shí)間≥48h。同時(shí)選定不少于3只培養(yǎng)基作空白對(duì)照培養(yǎng)。
微生物檢測時(shí)需注意:
1.檢測前應(yīng)仔細(xì)檢查每個(gè)培養(yǎng)皿的質(zhì)量,不能使用有變質(zhì)、破損或污染的培養(yǎng)基和培養(yǎng)皿。
2.采取一切措施防止采樣管的污染和其他人為對(duì)樣本的污染。
3.對(duì)培養(yǎng)基、培養(yǎng)條件及其他參數(shù)作詳細(xì)的記錄。
4.由于細(xì)菌種類繁多,差別甚大,計(jì)數(shù)時(shí)一般用透射光于培養(yǎng)皿背面或正面仔細(xì)觀察,不要漏計(jì)培養(yǎng)皿邊緣生長的菌落,并須注意細(xì)菌菌落或培養(yǎng)基沉淀物的區(qū)別,必要時(shí)用顯微鏡鑒別。
5.若在本實(shí)驗(yàn)室以外的環(huán)境中進(jìn)行檢測,則培養(yǎng)基在整個(gè)運(yùn)輸過程中必須對(duì)溫度進(jìn)行控制,培養(yǎng)基需放在含有冰塊的、消毒過的運(yùn)輸箱內(nèi),溫度控制在0℃~4℃,并在記錄中記錄運(yùn)輸溫度。
表4 潔凈室(區(qū))浮游菌的檢測要點(diǎn)1.檢測前應(yīng)仔細(xì)檢查每個(gè)培養(yǎng)皿的質(zhì)量,不能使用有變質(zhì)、破損或污染的培養(yǎng)基和培養(yǎng)皿。
2.采取一切措施防止采樣管的污染和其他人為對(duì)樣本的污染。
3.對(duì)培養(yǎng)基、培養(yǎng)條件及其他參數(shù)作詳細(xì)的記錄。
4.由于細(xì)菌種類繁多,差別甚大,計(jì)數(shù)時(shí)一般用透射光于培養(yǎng)皿背面或正面仔細(xì)觀察,不要漏計(jì)培養(yǎng)皿邊緣生長的菌落,并須注意細(xì)菌菌落或培養(yǎng)基沉淀物的區(qū)別,必要時(shí)用顯微鏡鑒別。
5.若在本實(shí)驗(yàn)室以外的環(huán)境中進(jìn)行檢測,則培養(yǎng)基在整個(gè)運(yùn)輸過程中必須對(duì)溫度進(jìn)行控制,培養(yǎng)基需放在含有冰塊的、消毒過的運(yùn)輸箱內(nèi),溫度控制在0℃~4℃,并在記錄中記錄運(yùn)輸溫度。
參數(shù)指標(biāo) | 浮游菌 |
檢測依據(jù) | JGJ71-90、GB/T16293-1996[3] |
檢測條件 |
1. 風(fēng)速或換氣次數(shù)和靜壓差達(dá)到級(jí)別要求,溫、濕度須達(dá)到規(guī)定的要求。 2. 浮游菌測試前,被測試潔凈室(區(qū))已經(jīng)過消毒。 3.對(duì)單向流,如100級(jí)凈化房間及層流工作臺(tái),測試應(yīng)在凈化空調(diào)系統(tǒng)正常運(yùn)行≥10min后開始。 4.對(duì)非單向流,如10 000級(jí),100 000級(jí)以上的凈化房間,測試應(yīng)在凈化空調(diào)系統(tǒng)正常運(yùn)行≥30 min后開始。 |
采 樣 點(diǎn) 位 置 |
1.測點(diǎn)位置離地0.8m~1.5m左右(略高于工作面)。 2.送風(fēng)口測點(diǎn)位置離開送風(fēng)面30cm左右。 3.可在關(guān)鍵設(shè)備或關(guān)鍵工作活動(dòng)范圍處增加測點(diǎn)。 |
采樣點(diǎn)數(shù)目和次數(shù) |
浮游菌測試的最少采樣點(diǎn)數(shù)目分為日常監(jiān)測及環(huán)境驗(yàn)證兩種情況,見表5。每個(gè)采樣點(diǎn)一般采樣一次。 1)對(duì)每個(gè)100級(jí)潔凈操作區(qū)域(如層流罩、層流工作臺(tái)),可在離藥物敞開口處30cm處設(shè)測點(diǎn),每班一次。 2)對(duì)每個(gè)10 000級(jí)潔凈工作區(qū)域(如藥物開口工作區(qū)),可在工作面處設(shè)測點(diǎn),每班一次。 |
采 樣 量 | 采樣量根據(jù)日常監(jiān)測及環(huán)境驗(yàn)證確定,每次最小采樣量見表6。 |
結(jié)果報(bào)告 | 以檢測區(qū)域的浮游菌最大菌落濃度(個(gè)/m3)進(jìn)行報(bào)告。 |
面 積 m2 |
潔 凈 度 級(jí) 別 | |||||
100 | 10 000 | 100 000或300 000 | ||||
驗(yàn)證 | 監(jiān)測 | 驗(yàn)證 | 監(jiān)測 | 驗(yàn)證 | 監(jiān)測 | |
<10 | 2~3 | 1 | 2 | 1 | 2 | — |
≥10~<20 | 4 | 2 | 2 | 1 | 2 | — |
≥20~<40 | 8 | 3 | 2 | 1 | 2 | — |
≥40~<100 | 16 | 4 | 4 | 1 | 2 | — |
≥100~<200 | 40 | — | 10 | — | 3 | — |
≥200~<400 | 80 | — | 20 | — | 6 | — |
400 | 160 | — | 40 | — | 13 | — |
注:1)表1中的面積,對(duì)于100級(jí)的單向流潔凈室(包括層流工作臺(tái)),指的是送風(fēng)口表面積,對(duì)于10 000級(jí),100 000級(jí),300 000級(jí)的非單向流潔凈室,指的是房間面積。 2)日常監(jiān)測的采樣點(diǎn)數(shù)目由生產(chǎn)工藝的關(guān)鍵操作點(diǎn)來確定。 |
潔凈度級(jí)別 | 采樣量,L/次 | |
日常監(jiān)測 | 環(huán)境驗(yàn)證 | |
100級(jí) | 600 | 1 000 |
10 000級(jí) | 400 | 500 |
100 000級(jí) | 0 | 100 |
300 000級(jí) | 0 | 100 |
表7 潔凈室(區(qū))沉降菌的檢測要點(diǎn)
參數(shù)指標(biāo) | 沉降菌 |
檢測依據(jù) | JGJ71-90、GB/T16294-1996[4] |
檢測條件 | 同浮游菌。 |
采樣點(diǎn)位置 |
1.工作區(qū)采樣點(diǎn)的位置離地0.8m~1.5m左右(略高于工作面)。 2.可在關(guān)鍵設(shè)備或關(guān)鍵工作活動(dòng)范圍處增加采樣點(diǎn)。 |
采樣點(diǎn)數(shù)目 | 沉降法的最少采樣點(diǎn)數(shù)可按表8確定。 |
采樣量 | 應(yīng)滿足最少培養(yǎng)皿數(shù),見表9。 |
結(jié)果報(bào)告 | 以檢測區(qū)域的最大菌落數(shù)(個(gè)/皿)進(jìn)行報(bào)告。 |
面 積m2 | 潔 凈 度 級(jí) 別 | ||
100 | 10 000 | 100 000或300 000 | |
<10 | 2~3 | 2 | 2 |
≥~<20 | 4 | 2 | 2 |
≥~<40 | 8 | 2 | 2 |
≥40~<100 | 16 | 4 | 2 |
≥100~<200 | 40 | 10 | 3 |
≥200~<400 | 80 | 20 | 6 |
≥400~<1000 | 160 | 40 | 13 |
≥1 000~<2 000 | 400 | 100 | 32 |
2000 | 800 | 200 | 63 |
注:表中的面積,對(duì)于單向流潔凈室,指的是送風(fēng)面面積;對(duì)非單向流潔凈室,是指的房間面積。 |
潔凈度級(jí)別 | 所需φ90mm培養(yǎng)皿數(shù)(以沉降0.5h 計(jì)) |
100 | 14 |
10 000 | 2 |
100 000或300 000 | 2 |
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